分析事例｜2次元電気泳動装置 "Auto2D" BM-100：シャープ(SMS)

本製品は、科学技術振興機構（JST）先端計測分析技術・
機器開発プログラムによる成果です。

高解像度を要求されるタンパク質リン酸化の検出例

熊本大学大学院生命科学研究部: 荒木令江先生提供。

ヒトビメンチンタンパク質のリン酸化パターンの検出。
Auto2Dを用いてヒト脳腫瘍タンパク質を2次元電気泳動した後、抗ビメンチン抗体を用いて検出した結果。
●IEFチップ：pH4-7　●PAGEチップ：10.0% ポリアクリルアミドゲル

結果	ヒト脳腫瘍由来ビメンチンタンパク質のN末端切断シフトおよびリン酸化シフトを同時に検出できた。

ヒト脳腫瘍由来ビメンチンタンパク質のN末端切断シフトおよびリン酸化シフトを同時に検出。

リン酸化プロテオーム解析例

北里大学薬学部生化学講座: 服部成介先生、佐藤龍洋先生提供。

リン酸化プロテオーム解析によるmTORシグナル伝達因子の検出。
mTOR阻害剤であるラパマイシン、もしくは作用機序の異なるmTOR阻害剤Aの添加、非添加の培養細胞を使用し、Auto2Dを用いてリン酸化プロテオーム解析を行った結果。
●IEFチップ：pH4-7　●PAGEチップ：10.0% ポリアクリルアミドゲル

結果	ラパマイシン処理でリン酸化されたタンパク質を数多く検出できた。

タンパク質の差異解析・タンパク質アイソフォーム分析例

(地独)東京都健康長寿医療センター研究所・老化機構研究チーム: 戸田年総先生、岩本真知子先生提供。

ヒト正常細胞と不死化（癌化）
細胞のタンパク質の比較解析。
Auto2Dを用いて蛍光試薬Aで標識したヒト正常繊維芽細胞と蛍光試薬Bで標識した不死化（癌化）細胞のタンパク質を2次元電気泳動した結果。
（赤: 試薬Aの蛍光画像、緑: 試薬Bの蛍光画像）
●IEFチップ：pH4-7
●PAGEチップ：10.0% ポリアクリルアミドゲル

結果	不死化（癌化）に伴い変化するスポット群を検出できた。

実験動物の脳の14-3-3
タンパク質のアイソフォームの解析。
Auto2Dを用いてマウス海馬細胞質タンパク質をpH4-5.5のカスタムIEFチップで2次元電気泳動した結果。
●IEFチップ：pH4-5.5
●PAGEチップ：10.0% ポリアクリルアミドゲル

結果	14-3-3 タンパク質のアイソフォームを含むスポット群を検出できた。

2次元電気泳動ーウェスタンブロッティング解析例

(独)産業技術総合研究所
バイオメディカル研究部門連携研究体バイオ技術産業化センター: 横山憲二先生
東京工科大学応用生物学部: 矢野和義先生、佐々木典子先生提供。

抗体ミックスを用いたTPA処理マウス正常形質細胞の抽出タンパク質の
変動検出。
DMSOもしくは200 nMのTPA（12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate）で処理した40μgの細胞由来タンパク質を、Auto2Dを用いて2次元展開、PVDF膜転写した後、下記6種類の抗体を混合した抗体ミックスを用いて2D-ウェスタンブロッティングを行った結果。
●IEFチップ：pH3-10　●PAGEチップ：10.0% ポリアクリルアミドゲル

結果	下記6種類の標的タンパクの抗体を用いた結果、各タンパク質のリン酸化を同時に検出できた。